Praktikum 2011 en la ETS Ing. Agronómica Medio Natural

DÍA 1:

Hoy ha sido nuestro primer día en el proyecto Praktikum. En primer lugar nos han hecho una pequeña presentación hablándonos de 4 de los grados que se pueden cursar en la Universidad Politécnica de Valencia. Éstos son: 

• Grado en Ingeniería Agroalimentaria y del Media Rural
• Grado en Ingeniería Forestal y del Media Natural
• Grado en Ciencia y Tecnología de los Alimentos
• Grado en Biotecnología

A continuación nos han dividido en los distintos grupos de trabajo y nos han presentado a nuestros respectivos tutores, Ana y Jorge, y a mi compañera, Andrea. Nos han enseñado la zona donde permaneceremos esta semana y el laboratorio de microbiología donde llevaremos a cabo la investigación.

En primer lugar, nos han introducido de forma general cual iba a ser el objetivo de nuestro trabajo. Durante los días siguientes nos dedicaríamos a cultivar, purificar e identificar distintos cultivos de levaduras aisladas de mosto de uva. Ese proceso se denomina selección clonal, y nos permite obtener levaduras autóctonas con buenas características enológicas. Una de las cosas que me ha llamado la atención ha sido saber que las levaduras se encuentran en la capa externa de la uva, y esa es la razón por la cual la uva no fermenta cuando está entera, pero al triturarla, las levaduras pasan al interior y comienzan la fermentación. También ha sido curioso descubrir que no hay una sola levadura encargada de llevar a cabo la fermentación de vino, sino que hay infinidad de ellas.

Pero antes de pasar a la acción, era necesario que conociéramos una serie de normas de laboratorio necesarias para nuestra seguridad. Debemos llevar siempre la bata, el pelo recogido, y debemos lavarnos las manos tanto al entrar y al salir del laboratorio. También han insistido en la importancia de la esterilización, ja que en un laboratorio de microbiología se debe controlar que es lo que estas cultivando.

Una vez hecha toda esta introducción, hemos pasado a la práctica. En primer lugar, como prueba de que los microorganismos están por todas partes, hemos tocado con la palma de la mano un medio de cultivo y la hemos colocado en la estufa a 28ºC para que las bacterias crezcan en condiciones favorables. Mañana veremos los resultados de nuestro experimento.

Nuestra próxima tarea era crear nosotras mismas el medio de cultivo donde vamos a cultivar las levaduras. Para crear 300 mL de medio de cultivo hemos mezclado 300mL de agua destilada, 15g de polvo YPD (el cual contiene extracto de levadura, peptona y glucosa) y 4’5 g de agar agar, que hará que la disolución se solidifique. Hemos creado dos disoluciones: una con los productos anteriores, y otra a la que hemos  añadido cloranfenicol, que se encargará de inhibir el crecimiento de procariotas, pero permitiendo el crecimiento de levaduras.

Después de mezclar estas disoluciones ha llegado la hora de esterilizarlas con la ayuda de una máquina llamada autoclave. Ésta se trata de una recipiente donde se almacenan los productos que se quieren esterilizar. Después de cerrarlo herméticamente, el funcionamiento de la máquina se asemeja al de una gran olla de vapor. El interior del autoclave aumenta su temperatura, creando el agua líquida que contiene en vapor de agua. El volumen de aire contaminado que se encuentra en el interior del autoclave es sustituido por el vapor se agua creado, y así, se consigue la esterilización. Pero este proceso conlleva un cierto tiempo, aproximadamente unos 20 minutos.

Una vez hecho el medio de cultivo, llega la hora de aislar microorganismos de otro medio de cultivo ya cultivado. Para eso hemos utilizado la técnica de la triple estría.

• En primer lugar cogemos con el asa de siembra (previamente flameada y esterilizada) una pequeña cantidad del medio de cultivo (donde hay millones de microorganismos) y hacemos la primera estría en un borde.
• A continuación esterilizamos la asa al rojo vivo y dejamos que se enfríe cerca de la llama.
• Hacemos la segunda estría utilizando los microorganismos que ya hemos colocado en la primera estría.
• Volvemos a esterilizar el asa de siembra.
• Finalmente hacemos la tercera estría, y así, hemos pasado de tener millones de microorganismos a tener células aisladas.

Mediante este proceso hemos aislado tanto levaduras como bacterias lácticas. Hemos metido las levaduras en la estufa a 28ºC y tendremos que esperar entre 24 y 48 para ver los resultados. En el caso de las bacterias, las hemos introducido en la estufa a 37ºC .

Pero antes de meter en la estufa los medios de cultivo, hemos de tener en cuenta que algunos microorganismos, los anaerobios, crecen mejor en ambientes sin oxígeno (anaerobiosis) o con muy poco oxígeno, aproximadamente un 5% (microaerofilias). Éste es el caso de los Lactobacillus, uno de los micoorganismos que hemos cultivado. Para conseguir este ambiente colocamos las placas petri en una jarra en la que también metemos un sobre que llevará a cabo una reacción exotérmica y que se encargará de consumir el oxígeno, disminuyendo su concentración.

Finalmente, cuando el autoclave ha terminado de trabajar los medios de cultivo, hemos comprobado que estos estaban estériles mediante unas cintas de autoclave que habíamos colocado previamente, y en las cuales aparecen unas tiras negras en el caso de que esté esterilizado. Finalmente hemos llenado las placas petri con las disoluciones que habíamos preparado y así hemos conseguido nuestros propios medios de cultivo.

Después de todo esté trabajo,  ha llegado la hora de ir a comer, y allí nos hemos reunido todos juntos, emocionados y contándonos todas las experiencias que habíamos vivido en nuestro primer día aquí. Veremos que nos espera mañana!