Praktikum 2011 en la ETS Ing. Agronómica Medio Natural

DÍA 2

Hoy hemos vuelto al laboratorio de nuevo. Antes de empezar, hemos tenido una pequeña conversación sobre la forma en que están relacionadas las levaduras con la fermentación, la respiración (tanto aerobia como anaerobia), la glucólisis y cómo algunos de los productos importantes obtenidos con la fermentación son el etanol y el CO2.

En primer lugar, hemos procedido a preparar los tubos con el medio de cultivo selectivo, para aislar las diferentes levaduras. Hemos partido de agua destilada estéril, añadiendo 1ml de mosto líquido en cada caso, mezclando y homogeneizando bien. Para aislarlas hemos utilizado un medio sólido, para evitar que se dispersaran físicamente y se mezclaran. El objetivo era aislar las levaduras y obtener una aproximación del número de ellas (cuantificarlas).

Para poder averiguar además la carga microbiana hemos hecho diluciones decimales seriadas. Para llevar esto a cabo, se necesita que el entorno sea aséptico, ya que no es deseable añadir carga microbiana de más. Una vez listas las diluciones, hemos sembrado 0,1ml del contenido de los tubos a las placas petri que contenían YPD con cloranfenicol con un asa digralsky. Hemos hecho este proceso por duplicado, obteniendo 2 muestras por cada disolución. Hemos metido las placas petri en la estufa a 28ºC, por lo que obtendremos los resultados a partir de mañana (24-48h).

A los medios de cultivo que preparamos ayer, los hemos sembrado con el método de triple estría y con el asa de siembra, las diferentes levaduras que queríamos investigar, para asegurar que si se contaminan las muestras siempre tendremos una reserva limpia y pura. Las hemos metido en la estufa a 28ºC y las dejaremos crecer.

Seguidamente, hemos hecho varias tinciones en fresco de distintas levaduras de las que sembramos ayer, ya crecidas. Para ello hemos utilizado portas donde hemos colocado pequeñas muestras de las levaduras, y tras haberlas teñido con azul de metileno diluido con agua destilada, las hemos cubierto con cubres. Luego las hemos observado con el microscopio fijándonos bien en cada detalle. Hemos podido distinguir a las levaduras Saccharomyces por su forma redondeada de otras con forma apiculada (forma de limón) entre otras, lo cual me ha parecido muy interesante. Incluso hemos podido apreciar algunas levaduras en proceso de gemación.

Además de esto, Ana nos ha explicado que las levaduras se dividen por gemación, y cada una muestra una gemación característica. Las levaduras apiculadas fermentan espontáneamente, proporcionando a los vinos una peculiaridad única.

Por último, hemos empezado a preparar el experimento que llevaremos a cabo mañana. Se trata de ver qué azúcares fermentan los distintos tipos de levaduras. Jorge nos ha explicado el proceso y hemos realizado algunos de los pasos. Los azúcares con los que podremos trabajar son:

• Glucosa
• Fructosa
• Maltosa
• Lactosa
• Almidón

Todos ellos a una concentración del 6% excepto el almidón, al 10%. Hemos preparado tubos con cada uno de los azúcares. Para cada levadura (6 tipos) hemos hecho 5 tubos (uno con cada tipo de azúcar).

Para llevar a cabo este experimento, hay que preparar un medio basal (4ml por tubo), esterilizarlo en el autoclave y repartirlo en los 30 tubos. Luego se añaden 2ml filtrados de cada uno de los azúcares por tubo. Gracias a la campana Durham que hemos incluido, podremos recoger los gases emitidos, y comprobar si las fermentaciones se han llevado a cabo, y de qué forma.