Praktikum 2011 en la ETS Ing. Agronómica Medio Natural

DÍA 3

Hoy ha sido el tercer día de esta experiencia. Una vez más hemos tenido la oportunidad de conocer nuevas técnicas de laboratorio y de llevar a cabo bastantes procesos.

Para empezar, después de otra pequeña charla en el despacho de Ana para aclarar en qué se iba a basar nuestro día, hemos terminado el ensayo de fermentación de compuestos carbonados que comenzamos ayer, con el fin de despejar dudas sobre cada tipo de levadura. Esta prueba, junto con la morfología que vimos ayer nos ayudarán a clasificar los tipos de levaduras.

Para realizar esta prueba hemos procedido de la siguiente forma:

• De un cultivo de levadura crecido, realizamos una suspensión en agua destilada
• Inoculamos 0,5ml de la suspensión en los tubos de medio de fermentación con campana Durham que preparamos ayer
• Incubamos a 28ºC y realizamos lecturas a las 24, 48 y 72 horas

Si se da el caso en el que hay crecimiento y gas en la campana Durham, la fermentación es positiva.

Después de esto, hemos comprobado las placas petri que dejamos incubando ayer, donde habíamos aislado las levaduras del mosto de uva. Ya había comenzado a destacar la presencia de varias colonias de levaduras en el medio de cultivo. Hemos picado las colonias y sembrado nuevas placas con el método de triple estría, una vez más. Con esto pretendemos obtener cultivos de las levaduras que podamos conservar, para mantener en todo momento las muestras purificadas y frescas.

También hemos aprendido a hacer tinciones Gram, y a distinguir las positivas de las negativas. Las positivas adquieren un color morado/violeta, mientras que las negativas aparecen de color rosado. El distinto comportamiento en la tinción es debido a diferencias en la estructura y composición química de la pared celular. Para llevarlas a cabo hay que seguir unos pasos importantes. Lo que hemos investigado son bacterias E.coli, y los Lactobacillus. Una vez tenemos la muestra  en el porta, se añade una gota de agua destilada. Se sujeta encima del mechero para evaporarla, y luego se pasa 4 veces muy cerca del foco de la llama con el fin de fijar las bacterias al porta. Hecho esto, se siguen estos pasos:

• Teñir con violeta de Genciana durante 1 minuto
• Sin lavar, reemplazar el colorante por el reactivo de Lugol, y dejarlo actuar 1 minuto
• Lavar con agua
• Decolorar con alcohol durante aproximadamente 30 segundos, y nunca sobrepasarlos
• Lavar con agua
• Teñir con fuchsina básica diluida durante 3 minutos
• Lavar con agua y dejar secar

Cuando todo esto estaba listo, hemos podido observarlas al microscopio diferenciando entre ellas por su morfología. Las E. coli aparecían muy pequeñas a una ampliación de 100x, por lo que se aprecia que realmente son muy pequeñas. Además tenían forma redondeada. Las Lactobacillus sin embargo, aparecían de forma alargada e incluso formando largas cadenas.

Por último, hemos congelado varias muestras de las levaduras de distintos tipos. Hemos trabajado en una campana de flujo laminar, previamente esterilizado gracias a un foco de luz ultravioleta presente en la misma. Hemos introducido muestras de cada tipo en unos viales (pequeños tubitos) y los hemos metido a un congelador con temperatura de -20ºC.

Ha sido un día completo y bastante interesante desde mi punto de vista. Empiezo a darme cuenta de que hacer el Praktikum ha sido una buena decisión que me ha permitido conocer un campo completamente nuevo para mí. ¡Mañana veremos qué más nos espera!