Praktikum 2011 en la ETS Ing. Agronómica Medio Natural

Hoy ha sido el último dia en el praktikum y como ayer terminé mi proyecto, hoy he empezado a preparar mi presentación, mi tutor me ha ayudado mucho (gracias Santi!!! 😀 y a los demás tambien muchas gracias!!! XD) y ya tengo claro todo lo que tengo que hacer; aunque hoy no ha sido tan entretenido como los otros dias me alegro de haver empezado con esto, ya que a mi sola en casa me hubiera costado mucho.

Me alegro de haber participado en este proyecto, ya que he podido conocer gente nueva (no como a Rocio, que ya la conozco XD) que le gusta lo mismo que a mi (aunque a Rocio no le gusta la biología), y también he podido conocer y hacer cosas que no pensaba que fuera a hacer hasta estar, por lo menos en segundo año de carrera. También me ha ayudado a  conocer mejor las diferentes opciones que puedo elegir, aunque aun no lo tengo claro del todo. No pensaba que estaria tan implicada en el trabajo que hacen dia a dia las personas que trabajan aqui, y además me he sentido muy agusto; creo que a todos nos han tratado muy bien y me alegro por eso. Aunque he tenido que atravesar el politécnico entero todos los dias, ya que el laboratorio donde trabajaba estaba muy lejos no me ha importado.

Lo que hemos hecho hoy en el laboratorio ha sido un PCR, que consiste en aumentar un fragmento de ADN, para que sea más fácil verlo, y así comparar los genes de varios individuos, conocer cuales tienen el mismo gen, cuales no lo tienen y en que se diferencian.

El proceso consiste en coger las muestras de ADN preparadas anteriormente, añadirles una enzima llamada Tac polimerasa, nucleótidos sueltos y cebadores. Todo esto se introduce en una máquina que lo único que hace es variar la temperatura, de este modo las dos cadenas de ADN se separan con calor, y al enfriarse se juntan con los cebadores, y se rellenan los huecos con los nucleótidos, este proceso se realiza muchas veces para conseguir mucha cantidad de ADN idéntico. Aqui hay un pequeño video que lo explica claramente :

http://www.maxanim.com/genetics/PCR/PCR.htm

Después de obtener las muestras hemos mezclado lo obtenido con colorante y agua para introducirlo en gel de agarosa y poder verlo mas tarde en una máquina que detecta la luz ultravioleta, de manera que podemos observar las bandas que si estan alineadas significa, que es el mismo gen, como observamos en la imagen.

En el dia de hoy lo primero que he hecho ha sido acabar la tarea que ayer no me dio tiempo a finalizar, consistía en extraer ADN a partir de un fragment de hoja, aunque realicé la mayor parte del proceso ayer, me faltaba secar todo el etanol de las muestras con la ayuda de una máquina que aparte de calentar producía el vacío en su interior, evaporandose así el etanol.

Después de esto tocaba introducir un poco de agua en als muestras para disolver el ADN. A continuación he empezado con la preparación de un  gel de agarosa, este proceso consiste en aplicar a una base unos polvos que tras hervir la mezcla y dejarla secar se convertía en una gelatina transparente; antes de que endureciera hemos introducido un molde de uno pequeños agujeros. Mientras secaba el gel he preparado unos marcadores con diferentes sustancias, y también he preparado una mezcla de agua, colorante y ADN disuelto en agua, que debía introducir en los pequeños agujeritos del gel, con mucho cuidado y mucha precisión; este gel se cubría de un líquido antes de introducir las muestras y finalizado el proceso se enchufan los electrodos, ya que, como el ADN tiene cargas negativas y la gelatina tiene microporos, este se desplaza hacia el polo positivo por los microporos de manera que lascantidades pequeñas se desplazan más rápidamente , y después con la ayuda de luz ultravioleta hemos podido ver las bandas de ADN, que son algo parecido a lo que vemos en la imagen, aunque estas son de ADN animal

 Otra cosa nueva que he hecho hoy ha sido la cuantificación de ADN por espectrofotometría, que consiste en introducir ADN disuelto en agua en una máquina que proyecta luz y detecta la cantidad de esta que atraviesa a la muestra, por lo que si hay ADN pasara menos luz, y de esta manera se puede conocer el número de nucleótidos y también la cantidad de proteínas. Este proceso me ha gustado mucho ya que se realiza con la ayuda de un ordenador, además también sirve para ver si el trabajo está bien realizado, ya que si hay muchas proteínas significa que el ADN esta «sucio», afortunadamente, el número de proteínas no era alto, y esto me ha tranquilizado mucho ya que creia que no lo había hecho bien, puesto que se necesita mucha precisión y no había hecho nada parecido nunca.

Aunque es el segundo dia que estoy en la universidad politecnica,  hoy he empezado realmente con als practicas. En primer lugar he ido al hinvernadero a recoger hojas sanas de berebjena para después poder extraer su ADN, que es de lo que trata el proyecto.

Al llegar al laboratorio lo primero que me ha llamado la atención ha sido el nitrógeno líquido, necesario para congelas los fragmentos de hojas y conservarlos en perfecto estado; esto me ha gustado mucho ya que aunque lo habia visto muchas veces en televisión nunca lo habia podido ver en persona. Cuando ya teniamos el nitrógeno líquido preparado lo primero que hemos hecho ha sido cortar los fragmentos de hoja, e introducirlos en un pequeño recipiente de plástico(microtubo) con dos bolitas de metal, a continuación y rápidamente lo depositábamos en un cubo, que contenia en nitrógeno. Con las hojas hojas completamente congeladas hemos introducido todas las muestras en una máquina que se encargaba de agitar los botecitos, y asi que las bolitas de metal trituraran los fragmentos de hoja. Más tarde con la ayuda de una pipeta hemos introducido mercaptoetanol;esto lo hemos realizado en la campana, puesto que esta sustancia es tóxica. Después de moverlo bien con un pequeño agitador hemos dejado las muestras en un bloque térmico durante media hora a 65º; hemos aprovechado este rato para almorzar y descansar un poco.

Al volver al trabajo lo primero que hemos hecho ha sido añadir cloroformo a las muestras, con el fin de desnaturalizar las proteínas, a continuación las hemos introducido en la centrifugadora. Al sacarlas he podido observas varias capas de sustancias en los recipientes, la capa inferior, la que contenía las proteínas era mas espesa, y la superior, mas líquida y ligera, contenía los ácidos nucléicos. Con mucho cuidado y con la ayuda de una pipeta de lo que se trataba era de extraer este líquido que contenía los ácidos nucleicos sin arrastrar con él proteínas; aunque parecia complicado, con un poco de paciencia, me ha costado menos de lo que creia. Hemos introducido este líquido en otros microtubos, previamente rotulados, que es una tarea muy importante, para poder identificar que muestra es de cada planta y no equivocarse en las conclusiones, hemos introducido etanol para que se uniera al agua y poder ver la maraña de ADN, que efectivamen te era visible, aunque havia que fijarse mucho; después lo hemos vuelto a introducir en la centrifugadora, y al sacarlo, lo único que se apreciaba era que el ADN se habia pegado al fondo del microtubo, y de este modo podíamos retirar el etanol fácilmente sin perder el ADN.

Aunque no he finalizado toda la tarea debido al tiempo disponible, he hecho mucho más de lo que me esperaba hacer y espero mañana poder continuar mi proyecto.

Hoy es el primer dia del praktikum, me han llevado a conocer las instalaciones de la universidad politécnica, y sobre  todo el lugar donde voy a estar durante toda esta semana. Las instalaciones son nuevas y grandes, al caminar por ellas me ha dado la sensacion de que todos los pasillos y todas las habitaciones eran iguales, pero espero que en esta semana llegue a conocerlos un poco para evitar perderme; también me han presentado a la gente con la que voy a estar haciendo las practicas y a las demás personas que trabajan en ese mismo sector, que me han explicado cada uno cual es su tarea, como la realizan y su finalidad. Aunque todos estos proyectos comparten fines parecidos, como abastecer a la poblacion de alimentos mas nutritivos, más resistentes, y de mejor calidad; cada sector se encarga de tareas diferentes, desde comprobar las secuencias de nucleótidos con un ordenador, a multipicar una planta a partir de tan solo un trozo de una de sus hojas.

El proyecto que se me ha asignado trata sobre la genética en plantas, aunque me hubiera gustado participar en uno que tratara sobre el genoma humano, el ADN cuando lo tienes delante aislado, da igual de que organismo sea; además me he dado cuenta de que las mejoras en agricultura son importantísimas, puesto que todos dependemos de ellas para sobrevivir y una gran ventaja esque son mas fáciles de manipular, por lo que se han conseguido muchas mejoras, no solo en crear plantas que produzcan mayor cantidad de alimento, sin0 también en que ese alimento sea más nutritivo, más sabroso, y que sea resistente; pero, no solo al frio, sino también a viruses y otros organismos que pueden hechar a perder cosechas enteras, ya que algunas personas creen que a las plantas no les afectan este tipo de enfermedades.

Durante este proyecto voy a aprender a extraer ADN de hojas de berenjena; para ello es necesaria la ruptura de las membranas celulares, la inhibición de la acción de las nucleasas, la desnaturalización y separación de proteínas mediante el empleo de disolvantes orgánicos, la precipitacion del ADN empleando algún alcohol y por último la digestióndel ARN para evitar que interfiera en procesos posteriores;

Hoy tan solo he aprendidoa a usar una pipeta, pero espero que mañana pueda empezar con la preparación de geles y la manipulación de genes, además de usar todas esas herramientas y máquinas, que por ahora son nuevas para mi, pero que espero que pueda aprender a controlarlas pronto.